ПАРТНЕРЫ

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ ДЛЯ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ИЗМЕНЕННЫХ ФОРМ БРУЦЕЛЛ

Плотникова Э.М., Салмаков К.М., Гильмутдинов Р.Я. ВНИВИ, г. Казань

В результате экологического воздействия природных и антропогенных факторов могут изменяться основные свойства различных микроорганизмов, в том числе возбудителя бруцеллеза. Установлено, что в настоящее время в природе наряду с S-формами встречаются SR, R-диссоцианты бруцелл, которые весьма затрудняют дифференциальную диагностику бруцеллеза, поскольку существующие методы и средства в таких случаях теряют эффективность и достоверность.

Иммунизацию мышей линии Ва1в/с проводили антигеном из штамма В. abortus R1096 четырехкратно, используя при этом различные способы его введения.

Титр антител, активность и специфичность в сыворотке крови мышей определяли в реакции иммуноферментного анализа (ИФА). Гибридные клетки, скрининг, клонирование проводили по методу Kohler и Milstein (1975).

Источником моноклональных антител (МКАТ) служили культуральные жидкости, полученные пассированием гибридом в брюшной полости мышей. Из испытанных 24 клонов наиболее активными и специфичными оказались семь, продуцирующие моноклональные антитела против бруцелла штамма R-1096. Обогащенную МКАТ глобулиновую фракцию получали путем двухкратного осаждения полунасыщенным раствором сульфата аммония. Очистку МКАТ проводили хроматографиеи на белок А. Кроме того было проведено определение видовой специфичности представленных для испытания моноклональных антител. Полученные МКАТ были применены для изготовления иммуноферментных коньюгатов, которые были в дальнейшем испытаны на активность и специфичность с использованием различных вакцинных, вирулентных и диссоциированных штаммов бруцелл.

Учитывая актуальность проблемы, нами разработана технология получения нового поколения иммуноферментных коньюгатов на основе МКАТ к бруцеллам штамма R-1096.

Исследования показали, что полученный коньюгат на основе МКАТ штамма R-1096 активен (рабочее разведение 1/600) и не вступает в реакцию с S-формами бруцелл. Показано, что оптимальным условием является нанесение на 96-луночный полистироловый планшет 100 мкг антигена.

Таким образом, установлено, что МКАТ к В. abortus R-1096, продуцируемые гибридными клетками, могут быть использованы в ИФА для индикации и идентификации S-формы штаммов бруцелл для приготовления диагностических препаратов.

ПРЕПАРАТЫ

ПАРТНЕРЫ

Документы